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CAR-T之后,慢病毒载体临床治疗再获成功

发布时间:2018-04-23 15:15 |  点击次数:

慢病毒载体(Lentivirus)作为一个常规的病毒实验载体已经熟用于我们的日常实验中,但是其是否可以安全的用于临床治疗一直饱受争议。继CAR-T细胞治疗后,近日,又一轰动性的研究成果展示了慢病毒载体的无限可能。

2018年4月19日出版的《新英格兰医学杂志》(NEJM,影响因子:72)发表论著《输血依赖型β-地中海贫血患者的基因治疗》(Gene Therapy in Patients with Transfusion-Dependent β-Thalassemia)。研究者,用了慢病毒介导的基因治疗方案——LentiGlobinBB305对β地中海贫血患者进行了治疗,并获得了显著疗效同时显示,慢病毒载体的基因疗法是安全的。该新型基因疗法可使输血依赖型β地中海贫血(TDT)患者免于或减少长期输血。

背景资料

地中海贫血(Thalassemia)于1925年由Cooley和Lee首先描述,最早发现于地中海区域,当时称为地中海贫血,国外亦称海洋性贫血。这是一类由于常染色体遗传性缺陷,引起珠蛋白链合成障碍,使一种或几种珠蛋白数量不足或完全缺乏,因而红细胞易被溶解破坏的溶血性贫血。

珠蛋白链的分子结构及合成是由基因决定的。γ、δ、ε和β珠蛋白基因组成“β基因族”,ζ和α珠蛋白组成“α基因族”。正常人自父母双方各继承2个α珠蛋白基因(αα/αα)合成足够的α珠蛋白链;自父母双方各继承1个β珠蛋白基因合成足够的β珠蛋白链。由于珠蛋白基因的缺失或点突变,肽链合成障碍导致发病。地中海贫血分为α型、β型、δβ型和δ型4种,其中以β和α地中海贫血较为常见

1. β珠蛋白生成障碍性贫血(β地中海贫血

β珠蛋白生成障碍性贫血(简称β地贫)的发生的分子病理相当复杂,已知有100种以上的β基因突变,主要是由于基因的点突变,少数为基因缺失。

2. α珠蛋白生成障碍性贫血(α地中海贫血

大多数α珠蛋白生成障碍性贫血(地中海贫血)(简称α地贫)是由于α珠蛋白基因的缺失所致,少数由基因点突变造成。白基因的缺失所致,少数由基因点突变造成。

目前,有效的治疗手段有异源性造血细胞移植、长期规律性红细胞注射和祛铁治疗,但是有排斥风险,并发症,和其他毒性效应。因此基因治疗方案正在被评估作为一种新的方案。(来源于:百度百科

治疗流程

 

  1. 在美国对病人给药filgrastim 和 plerixafor处理,收集病人造血干细胞与原代细胞;

  2. 富集CD34+细胞,并对细胞进行BB305慢病毒载体转导处理,得到的药物产品命名为LentiGlobin,低温储藏;

  3. 对病人进行连续4天的白消安( busulfan )骨髓抑制处理,(注射剂量依据病人血清白消安药代动力学分析结果来调整);

  4. 72小时监察,确定病人达到医学认定的稳定期(连续3天病人每立方毫米血样中有至少500个中性粒细胞);

  5. 在HGB-204临床实验中,β0/β0基因型病人注射剂量中位值为11.0(6.1-18.1)百万CD34+细胞,其他基因型注射7.2(5.2-13.0)百万CD34+细胞;

  6. 在HGB-205临床实验中,1位IVS1-110突变基因型病人注射8.8百万CD34+细胞,其余3位βE/β0基因型病人注射剂量中位值为12.0(8.9-13.6)百万CD34+细胞(注射量见下表);

  7. 综合分析各项检测指标并进行安全性评价。

     

  • 造血功能恢复

经过lentiGlobin药物静脉注射治疗后,植入性中性粒细胞和血小板在中位值17天及30天出现,期间未有流血并发症出现。载体在PBMCs中的平均拷贝数如下图所示,在HGB-204的每二倍体基因组中的拷贝数为0.3,在HGB-205的拷贝数为2.0。且在PBMCs中的拷贝数与载体在药物中的拷贝数成正相关。病人血液中HBAT87Q蛋白水平提高,对红细胞注射依赖量的减少73%。



在22位病人中,13位为非β0/β0基因型,除一人外(其注射药物中载体拷贝数为0.3,注射后体内为0.1,拷贝数太少)其余均停止了红细胞注射治疗,HbAT87Q含量中位值是6.0g每分升,血红蛋白含量为11.2。9位β0/β0基因型病人,与两年前未接受治疗相比,对红细胞注射的需求量减少73%。
在两项研究中,血液中HbAT87Q表达水平与血液中载体拷贝数相关,与年龄、基因型、脾切除状态无关

  • 溶血和红系造血异常影响

总体上病人血红蛋白趋于稳定,溶血现象趋于缓解。红系造血异常现象在3位βE/β0基因型中被消除,在IVS1-110基因突变型病人中无效造血现象的生物标记物也未被发现。

  • 安全性评价

BB305载体去除了cHS4绝缘体核心来增加载体的稳定性和滴度,且整合了巨细胞病毒启动子来驱动载体在包装细胞中转录。在两项研究中,高滴度、大规模、临床应用级别的BB305慢病毒载体使用离子交换色谱法进行生产和纯化。BB305慢病毒载体的在两个研究中,病人并未出现安全问题,复制能力的慢病毒也未被检测到,血液样本检测载体为多克隆整合位点(202-8685),并未发现dominant clones。在本次研究之前的LG001号临床研究中的1003号病人曾出现过在HNGA2位点的优势克隆,但随后的研究表明病人此为点的优势后续自主消除,期间未因此发生副作用。

研究表明,LentiGlobin药物(慢病毒载体)可成功代替β地中海贫血症患者的传统治疗(等待捐献者匹配骨髓),通过基因改造的手段进行治疗,其安全性得到了全面的临床验证,患者响应率为100%,而这项研究目前仍在跟进,拟定后续跟进13年。这将是人类疾病治疗史上的里程碑事件,基因治疗技术经过长期理论实践,已然结出了造福全人类的果实。