质粒转不进细胞咋办？

用病毒啊！

慢病毒为啥叫慢病毒呢？

表达很慢的病毒啊！

慢病毒、腺病毒、腺相关病毒我要怎么选？

我很头疼………………

从本期开始我们将从病毒的基础知识、如何进行病毒包装、如何提高病毒滴度、如何高效使用病毒等几个方面做系统的介绍！

 

• 常规三种病毒载体的比较
  
   

 

    认真看完这张表，基本也就了解了啥时候该选啥病毒了吧，下面再详细聊聊这三种病毒载体的特点。

• 慢病毒

  慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体（RNA类病毒）。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。慢病毒介导的基因过表达，可以实现目的基因在细胞内的长期稳定表达。

• 构建稳定细胞株的必选载体；

• CAR-T细胞治疗中主要使用的病毒载体；

• 病毒包装周期，2~3周内完成；

• 慢病毒感染细胞多数需要polybrene辅助。

• 感染细胞后2-~4天后呈现表达丰度。

   

包装流程及感染示意图：

 

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• 腺病毒

    腺病毒载体（adenovirus）是以腺病毒为原型进行基因功能改造而成的，无外壳的双链DNA病毒，病毒载体转基因效率高，体外实验通常接近100%的转导效率；可转导不同类型的人组织细胞，不受靶细胞是否为分裂细胞所限；容易制得高滴度病毒载体，在细胞培养物中重组病毒滴度可达11次方；进入细胞内并不整合到宿主细胞基因组，仅瞬间表达，安全性高。

 

• 基因瞬时表达首选载体；

• 高浓度浓缩，可用于动物实验；

• 病毒包装周期：6~8周；

• 腺病毒可以直接感染细胞无需polybrene辅助。

• 感染细胞后24H后呈现表达丰度。

• 毒种可在HEK293A细胞中反复扩增。

   

包装流程及感染示意图：

 

 

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• 腺相关病毒

   腺相关病毒（AAV）是一种复制缺陷型细小病毒，其增殖复制需要腺病毒或疱疹病毒的辅助。由于其安全性好、宿主细胞范围广(分裂和非分裂细胞)、免疫源性低，在体内表达外源基因时间长，具有明显的组织噬性等特点，这使rAAV成为用于基因转移和基因治疗的一个非常有吸引力的工具载体。

• 体内能长时间表达外源基因；

• 低免疫原性，良好的基因治疗载体；

• 较高的生物安全级别

• 病毒包装周期：6~8周；

• 组织噬性——组织靶向！！！

包装流程及感染示意图：

 

AAV组织噬性

AAV1载体：明显的骨骼肌嗜性（包括心肌），神经组织也可以感染；

AAV2载体：泛嗜性；有效转导肌肉，肝脏，脑组织，视网膜;

AAV5载体：视网膜、神经系统、关节滑膜嗜性、肺；

AAV8载体：明显肝嗜性，视网膜、神经组织也可以感染；

AAV9载体：心肌嗜性，可穿过血脑屏障；

AAV-DJ：广谱性侵染各种细胞，可做细胞实验